給予動(dòng)物鼠籠傾斜、潮濕墊料、高溫、噪音、束縛、電擊、游泳、晝夜節(jié)律顛倒等不同刺激因子，且刺激因子安排為多變性和不可預(yù)測(cè)，可誘導(dǎo)性是模型制造成功的關(guān)鍵。該模型被廣泛用于抑郁癥神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制及抗抑郁藥物的研究，以及伴發(fā)的焦慮、學(xué)習(xí)記憶障礙及防護(hù)藥物研究。

本研究中，通過水迷宮實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看CUMS模型組水迷宮尋臺(tái)潛伏期顯著性延長(zhǎng)，避暗錯(cuò)誤次數(shù)顯著性增加、避暗潛伏期顯著性減少等，這些行為學(xué)結(jié)果，提示大小鼠CUMS模型成功。此外本實(shí)驗(yàn)還對(duì)CUMS模型的機(jī)制進(jìn)行了基礎(chǔ)研究，認(rèn)為CUMS模型會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物皮層的5-HT、DA、Ach、NE等神經(jīng)遞質(zhì)水平顯著性降低（P<0.05）。因此我們認(rèn)為采用慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激，35天可以造成大鼠和小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。

模型技術(shù)難點(diǎn)在于對(duì)于CUMS刺激因子的選擇，刺激因子的選擇可能影響實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷某晒εc否，常用的刺激因子有禁食(12 h)、禁水(12 h)、冷水游泳(4 °C，5 min)、熱水游泳(42 °C，5 min)、動(dòng)物叫聲(0.5 h)、束縛(使用自行研發(fā)的小鼠行為限制器，長(zhǎng)20 cm，直徑7 cm)、晝夜顛倒、配對(duì)飼養(yǎng)、濕籠、傾籠等。每日選擇2~3 種刺激，并盡量使應(yīng)激程序符合不可預(yù)測(cè)的特點(diǎn)，以避免動(dòng)物產(chǎn)生適應(yīng)性。相同的刺激因子應(yīng)該隔3-7日再進(jìn)行。

本研究通過不同的刺激因子對(duì)老鼠造成慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型，通過水迷宮、避暗等經(jīng)典行為學(xué)指標(biāo)，以及5-HT、DA、Ach、NE等神經(jīng)遞質(zhì)基礎(chǔ)機(jī)制指標(biāo)，表明了慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激誘導(dǎo)老鼠學(xué)習(xí)記憶損傷模型的成功，并且該模型對(duì)于大小鼠具有相同的效果，本模型可用于進(jìn)一步的改善學(xué)習(xí)記憶藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià)。

本實(shí)驗(yàn)采用健康成年SPF級(jí)老鼠。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物用水均經(jīng)過除菌處理。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以完整的包裝直接進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，觀察適應(yīng)5天后無異常情況，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物操作均符合動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等符合國(guó)家相關(guān)法律規(guī)定。

1. 不同時(shí)長(zhǎng)社會(huì)挫敗對(duì)懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響

可以從圖1 看出，社會(huì)挫敗造模21天后，模型組與空白組存在顯著性差異，陽性藥組可以顯著性降低懸尾不動(dòng)時(shí)間（P < 0.05）。

圖1 不同時(shí)長(zhǎng)社會(huì)挫敗對(duì)懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響

2. 社會(huì)挫敗對(duì)強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響

可以從圖1 看出，社會(huì)挫敗造模7天，強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間就比空白組出現(xiàn)顯著性增加（P< 0.05），但是造模14天并沒有出現(xiàn)顯著性差異（P > 0.05），造模21天后又出現(xiàn)顯著性差異（P < 0.05）。

圖2 不同時(shí)長(zhǎng)社會(huì)挫敗對(duì)強(qiáng)迫游泳不同時(shí)間的影響

C57BL /6J小鼠。雄性多見。

1. 操作流程

實(shí)驗(yàn)前將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和應(yīng)激組，每天將應(yīng)激組C57BL /6 小鼠作為侵入者放入長(zhǎng)期單獨(dú)飼養(yǎng)CD1 小鼠的籠內(nèi)，進(jìn)行身體接觸5 min。5 min 內(nèi)C57BL /6 小鼠將受到CD1小鼠攻擊并表現(xiàn)出逃跑、恐懼、順從等從屬性特征。5 min 身體接觸后，使用透明并且有很多小孔的有機(jī)玻璃板將二者隔開進(jìn)行心理應(yīng)激24 h，保證C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠，聽到CD1 小鼠的聲音，而且能聞到CD1 小鼠的氣味，應(yīng)激持續(xù)7d或21 d。應(yīng)激結(jié)束后，將C57BL /6 小鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)。

為了評(píng)估應(yīng)激組C_57小鼠的社會(huì)交互行為，在接受最后一次攻擊的24小時(shí)內(nèi)開展社會(huì)交互實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)備還包括40cmx40cmx40cm大小的白色開放場(chǎng)，7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及錄像設(shè)備。社會(huì)交互測(cè)試由兩部分組成，每部分記錄時(shí)長(zhǎng)為2.5分鐘。第一部分，將塑料空盒置于測(cè)試場(chǎng)一側(cè)中央位置，輕輕提放被測(cè)試者(C57小鼠)于曠場(chǎng)中央，自由活動(dòng); 150秒后，將被測(cè)試者移除放于自身飼養(yǎng)籠中;同時(shí)將具有攻擊性的CD1小鼠放在塑料盒內(nèi)，準(zhǔn)備結(jié)束后重新放入被測(cè)試者。前后兩次操作中間的準(zhǔn)備時(shí)間控制在30s內(nèi)。分別記錄2個(gè)部分動(dòng)物在社會(huì)交互區(qū)的時(shí)間。社會(huì)交互區(qū)定義為以塑料盒為中心，允許C_57小鼠與盒子及里面的CD1鼠進(jìn)行互動(dòng)的區(qū)域。

2. 模型分析指標(biāo)

2.1 懸尾實(shí)驗(yàn)

于造模結(jié)束后第3 天開始實(shí)驗(yàn)。將膠布貼于距小鼠尾尖部約1 cm 處，使小鼠倒掛于懸尾箱支架上，傳感器接收小鼠掙扎時(shí)的張力變化信號(hào)，將信號(hào)處理轉(zhuǎn)化后送往計(jì)算機(jī)，小鼠懸尾實(shí)時(shí)檢測(cè)分析處理系統(tǒng)自動(dòng)記錄小鼠不動(dòng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)總共6 min，適應(yīng)2 min 后系統(tǒng)自動(dòng)統(tǒng)計(jì)小鼠后4 min 內(nèi)懸尾累積不動(dòng)時(shí)間(“不動(dòng)”即小鼠停止掙扎不動(dòng)或無任何活動(dòng))。

2.2 強(qiáng)迫游泳

利用計(jì)算機(jī)圖像實(shí)時(shí)檢測(cè)分析處理系統(tǒng)自動(dòng)分析記錄動(dòng)物運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。將小鼠放入小鼠強(qiáng)迫游泳儀器中( 高20 cm，直徑18 cm，水深12 cm)，保持水溫(23~25 °C)。動(dòng)物適應(yīng)2 min后，系統(tǒng)自動(dòng)記錄動(dòng)物后4 min 內(nèi)的累積不動(dòng)時(shí)間( 不動(dòng)狀態(tài)即小鼠四肢有輕微動(dòng)作以保持頭部在水面，小鼠呈現(xiàn)出停止掙扎或呈漂浮狀態(tài))。

抑郁癥是由抑郁癥是一種嚴(yán)重影響人體健康的精神疾病，其患病率約占總?cè)丝诘?%。世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)到2020年抑郁癥將成為第二大主要疾病之一，給社會(huì)帶來極大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，抑郁癥已成為全世界共同面臨的衛(wèi)生健康難題。近年來研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激性生活事件是抑郁癥的顯著促發(fā)因素，引發(fā)抑郁的主要原因是來自慢性、低強(qiáng)度、長(zhǎng)期的日常壓力。

目前，抑郁癥尤其是中重度抑郁癥的主要治療手段仍是藥物治療。20多年以來，隨著人們對(duì)抑郁癥機(jī)制研究的深入，抗抑郁藥物的研究開發(fā)也取得了極大進(jìn)步。由于合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、不良反應(yīng)大、藥價(jià)高和易復(fù)發(fā)等缺陷，人們逐漸把目光投向傳統(tǒng)的中醫(yī)藥。傳統(tǒng)藥物和天然藥物作為抗抑郁候選藥物的研究開發(fā)已日漸成為國(guó)內(nèi)外的熱點(diǎn)。

采用社會(huì)失敗應(yīng)激，更好地模擬人類抑郁癥的發(fā)生方式，建立動(dòng)物模型對(duì)于探索抑郁癥的病因?qū)W是很有必要的。另外，社會(huì)失敗應(yīng)激所導(dǎo)致興趣缺失和社會(huì)逃避的抑郁行為是長(zhǎng)久潛伏的，通過慢性而不是急性的抗抑郁治療可以糾正社會(huì)失敗應(yīng)激所致的抑郁行為，我們的相關(guān)研究結(jié)果也與此一致(將另文報(bào)道)。通過社會(huì)失敗應(yīng)激模型，可以建立穩(wěn)定的用于研究抑郁病理生理學(xué)的動(dòng)物模型。